Перед отбором проб может потребоваться интенсивное встряхивание, чтобы возбудить кластеры цианобактерий. Клетки очень маленькие, что усложняет использование подсчета под микроскопом измерения биомассы. Полезные электронные счетчики частиц для подсчета частиц до приблизительно 1 мкм. Различные культуры роста могут использоваться для сохранения культуры запаса. Следует иметь в виду, что кремний должен присутствовать в среде. Из-за липидного производства клетки водорослей иногда склонны к агрегации в поверхностной пленке.

В этих условиях следует принимать специальные меры при отборе проб для определения биомассы для получения репрезентативных образцов. Может быть интенсивное встряхивание, например, с использованием вихревого смесителя. Можно использовать один из следующих двух носителей роста.

При приготовлении этих сред следует использовать аналитические химикаты или вещества и деионизированную воду. Это предотвращает осаждение железа при минимизации хелатирования ионов тяжелых металлов. Приблизительная связь между рН при 25 ° С и молярной концентрацией бикарбоната составляет.

Элементарный состав тестовых сред. Стерилизовать исходные растворы мембранной фильтрацией или автоклавированием. Не обрабатывайте исходные растворы 2 и 4 в автоклаве, а стерилизуйте с помощью мембранной фильтрации. Подготовьте среду для выращивания, добавив соответствующий объем исходных растворов от 1 до 4 в воду.

Примечание 1: Используйте только для тестовых видов диатомовых водорослей. Примечание 2: Используется только в средах для культивирования суточных видов. Целью культивирования по следующей процедуре является получение культур водорослей для тестирования токсичности.

Используйте соответствующие методы для обеспечения того, чтобы культуры водорослей не были инфицированы бактериями. Аксенические культуры могут быть подходящими, но культуры и культуры должны быть созданы и использованы. Все операции должны проводиться в стерильных условиях, чтобы избежать загрязнения бактериями и другими водорослями.

Метод тестирования: инструменты и инструменты. Процедуры получения водорослевых культур. Подготовка питательных растворов. Все солевые питательные соли готовят в виде концентрированных исходных растворов и хранят в темноте и при охлаждении. Эти растворы стерилизуют фильтрованием или автоклавом.

Среду получают путем добавления правильного количества исходного раствора в стерильную дистиллированную воду, чтобы избежать любой инфекции. Добавляют 0, 8% агара для получения твердой среды. Племенные культуры представляют собой небольшие культуры водорослей, которые регулярно переносятся на свежие среды, где они служат в качестве исходного тестового материала. Если культуры не используются регулярно, их инокулируют в наклонный агар. Затем их переносят в свежую среду не реже одного раза в два месяца.

Экстракционные культуры выращивают в колбах Эрленмейера, содержащих подходящую среду. При бустерной инъекции стерильная пипетка переносится в свежую срединную колбу такой «старой» культуры, так что начальная концентрация в быстрорастущих водорослевых видах примерно в сто раз меньше старой культуры.

Скорость роста водорослевых видов можно вывести из кривой роста. Если известно, можно оценить плотность, при которой культура должна быть перенесена на свежую среду. Это должно быть сделано до фазы смерти культуры. Целью прекультивов является обеспечение достаточного количества водорослей для инокуляции тестовых культур. Прекуратура культивируется в условиях испытаний и используется при экспоненциальном росте, то есть обычно после инкубационного периода от 2 до 4 дней. Если в культурах водорослей содержатся деформированные или аномальные клетки, их необходимо удалить.

Анализ данных с использованием нелинейной регрессии. Реакция на тесты роста водорослей и другие тесты на рост микробов - рост биомассы - по своей природе непрерывная или метрическая переменная - скорость процесса, если скорость роста используется и ее интегральная по времени, если выбрана биомасса. Оба они описываются соответствующим средним ответом неэкспонированных контрольных реплик, которые показывают максимальный ответ в данных условиях - где свет и температура являются первичными определяющими факторами в тесте на рост водорослей.

Система распределена или однородна и может рассматриваться как континуум на биомассе без учета отдельных ячеек. Распределение рассеяния типа ответа для такой системы зависит исключительно от экспериментальных факторов. Это контрастирует с типичными ответами на биообъекты квантовых данных, которые часто считаются доминирующей составляющей рассеяния. Контрольные ответы являются либо нулевыми, либо базовыми.

Следует иметь в виду, что все ответы имеют связанную с этим ошибку и что, по-видимому, отрицательные запреты могут вычисляться только в результате случайных ошибок. Связь концентрации и реакции, полученная в тестах на ингибирование роста водорослей, была успешно описана несколькими простыми математическими функциями. Следует иметь в виду, что анализ может быть простым, минимизируя остаточные квадраты или взвешенные квадраты, если он компенсирует гетерогенность рассеяния.

Лучше использовать измерение из каждой отдельной колбы, чем средние значения повторения, чтобы получить как можно больше информации. Если рассеяние велико, практический опыт предполагает, напротив, что средние значения репликации могут обеспечить более надежную математическую оценку, на которую будут в меньшей степени влиять систематические ошибки данных, чем в случае каждой сохраненной отдельной точки данных. Нарисуйте кривую и измеренные данные и проверьте, правильно ли построена кривая. Анализ остаточных значений может быть особенно полезным инструментом для этой цели.

Если выбранная функциональная связь для выражения реакции концентрации не описывает хорошо всю кривую или какую-то важную ее часть, такую ​​как реакция с низкой концентрацией, выберите другой вариант подгонки кривой - например, асимметричную кривую, такую ​​как функция Вейбула, вместо симметричной кривой, Отрицательное торможение может быть проблемой, например, логнормальной функцией распределения, которая аналогичным образом требует альтернативной функции регрессии. Такие отрицательные значения не рекомендуется назначать нулевое или небольшое положительное значение, поскольку это искажает распределение ошибок.

Опыт практических испытаний показал, что точность теста на рост водорослей обычно дает достаточно точную оценку 10% -ного ингибирования, если данные являются достаточными - если стимуляция при низких концентрациях является искажающим фактором. Экспериментальное рассеяние обычно не является постоянным и обычно включает пропорциональную составляющую, поэтому удобно проводить взвешенную регрессию. Обычно предполагается, что весовые коэффициенты для такого анализа обратно пропорциональны дисперсии.

Многие регрессионные программы позволяют проводить взвешенный регрессионный анализ с весовыми коэффициентами, перечисленными в таблице. Нормализация средним контрольным ответом приносит некоторые основные проблемы и приводит к довольно сложной структуре рассеяния. Разбирая ответы посредством среднего контрольного ответа, чтобы получить процентное значение ингибирования, дополнительная ошибка вызвана средней ошибкой управления. Если эта ошибка не является незначительной, необходимо скорректировать весовые коэффициенты в регрессионном анализе и доверительные интервалы для ковариации.

Важно иметь в виду, что высокая точность важна в оценочном среднем контрольном ответе для минимизации полного рассеяния при относительном отклике. Контрольная средняя ошибка обратно пропорциональна квадратному корню из числа усредненных контрольных реплик, иногда может быть полезно записать исторические данные, что значительно уменьшит погрешность. Альтернативный подход - не нормализовать данные, а не делать абсолютные ответы, в том числе контрольные данные ответа, а вводить контрольные значения ответа в качестве дополнительного параметра, который будет корректироваться с помощью нелинейной регрессии.

В то время как обычное уравнение регрессии является двумерным, этот метод требует ввода трех параметров и, следовательно, требует большего количества точек данных, чем нелинейные регрессии, выполняемые с данными, которые нормализуются с помощью заданного контрольного ответа.

Обратные доверительные интервалы. Расчет доверительных интервалов нелинейной регрессии путем обратной оценки является несколько сложным и не является доступным стандартным вариантом в общих пакетах статистических компьютерных программ. Приблизительные доверительные интервалы могут быть получены с использованием стандартных нелинейных регрессионных программ с повторной параметризацией, которая включает переписывание математического уравнения с использованием требуемых точечных оценок.